你了解酶标仪中荧光与化学发光的区别吗? - 普朗医疗 
搜索
电话
400 696 6267
热门搜索
你了解酶标仪中荧光与化学发光的区别吗?
加入时间:2024-02-22 16:03:58  当前新闻点击率:373   标签:酶标仪 

近年来,酶标仪的功能逐渐增多,应用领域也不断得到拓展。其中常见的多功能酶标仪为具有光吸收(ABS),荧光强度(FL)和化学发光(LUM)基础三功能酶标仪,光吸收主要用于检测OD值,包括Elisa,酶活,酶动力学,OD600等,荧光与化学发光则检测的是荧光强度。

那荧光与化学发光有什么区别呢,什么实验该用荧光检测,什么又该用化学发光检测呢?

酶标仪

首先,荧光是被激发后,酶标仪检测发射光的荧光强度,例如,荧光染料Hoechst,PI,Calcien AM等以及荧光报告基因GFP,RFP等;化学发光是指通过化学反应或生物化学反应发出的可见光,与荧光相比不需要激发光,所以具有更低的背景。

荧光原理:荧光是短波长的光激发,电子从基态跃迁至激发态,激发态不稳定,电子需要重新回到基态,这时损失的一部分能量,会以荧光的形式呈现。

荧光检测原理

荧光检测原理

化学发光原理:按原理可以分为两类,其中一类为化学反应发光,常见是鲁米诺的反应发光,另外一类为生物化学发光,例如萤火虫荧光素酶,海肾荧光素酶。

化学发光检测原理

化学发光检测原理

下面我们来看一下荧光与化学发光都有哪些应用?

一. 荧光

1. 细胞活力,毒性检测方法

实验原理:荧光强度与活细胞数成正比、灵敏度高、特异性好、组合成复合荧光染料使用。例如:根据细胞膜完整性差异,荧光染料(Calcein AM,EthD-III)对活细胞/死细胞的穿透特性不同,对其进行特异性标记,有常规荧光染料也有优化试剂盒。

2. 活细胞中荧光蛋白的表达

荧光蛋白在监测生物体内研究中,起到越来越重要的作用,随着时间的推移,目前可以使用的荧光蛋白的种类也越来越丰富。他们都可以在众多细胞和组织中被克隆复制,稳定且毒性小,不需额外辅助也可在体内产生荧光。

例如:GFP报告基因是一种同时编码GFP和靶标序列的基因, 把GFP的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,通过检测GFP的荧光强弱来标定目的基因的表达调控

二.化学发光

1.  双荧光素酶报告基因

报告基因一般用来研究真核生物的基因表达,在双报告基因实验中,细胞需转染两种质粒,一种含有目的基因调控的启动子,另一种包含一个质控基因的组成型启动子,将两个报告基因共转染,可以更好的减小实验误差。

Promega的双报告基因实验(DLR)允许使用者在一个微孔板中分别检测萤火虫和海肾荧光素酶,其中萤火虫作为报告基因,海肾作为质控基因,分别进行两次化学发光读数。

2. 鲁米诺试剂—化学发光

ELISA化学发光夹心法试剂盒QuantiGlo luminescent ELISA (R&D Systems) ,通过化学反应产生荧光,可以用来检测人类VEGF,内皮素-1,IL-6,IL-8,IL-1,IL-2,TNF-alpha等。